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Meilunbio活死細(xì)菌染色試劑盒(可應(yīng)用流式分析)

LIVE/DEADBacterial Viability and Counting Kit 

for flow cytometry

產(chǎn)品貨號(hào)：MA0390  100T [￥4500.00] 

http://www.sjykeji.com/goods.php?id=22922

美侖活死細(xì)菌染色試劑盒（LIVE/DEAD Bacterial Viability and Counting Kit, for flow cytometry）可以通過(guò)流式細(xì)胞儀有效的區(qū)分活、死細(xì)菌并實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)；而且對(duì)各類(lèi)細(xì)菌的混合物也可以實(shí)現(xiàn)定量分析檢測(cè)。該試劑盒采用兩種核酸染料來(lái)進(jìn)行細(xì)菌活力測(cè)定：綠色熒光染料meilungreen（美侖自主研發(fā)，功能等同于SYTO 9）以及紅色熒光染料PI（碘化丙啶），并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)微球精準(zhǔn)測(cè)量樣品體積。用適當(dāng)比例的meilungreen與PI混合物染色時(shí)，細(xì)胞膜完好的細(xì)菌發(fā)出明亮的綠色熒光，而細(xì)胞膜受損的細(xì)菌則表現(xiàn)出綠色熒光明顯減弱，同時(shí)發(fā)出較強(qiáng)的紅色熒光。細(xì)胞類(lèi)型和革蘭氏特征會(huì)影響死細(xì)菌產(chǎn)生紅色熒光的強(qiáng)度。meilungreen與PI染料在大部分流式細(xì)胞儀中都是由488nm激光器實(shí)現(xiàn)有效激發(fā)的，各自的核酸復(fù)合物熒光信號(hào)可分別在綠色通道和紅色通道中檢測(cè)到，并且?guī)缀鯖](méi)有背景熒光。

標(biāo)準(zhǔn)微球懸浮液作為樣品體積的參考標(biāo)準(zhǔn)，尺寸和熒光經(jīng)過(guò)仔細(xì)篩選，以確保微球在流式細(xì)胞檢測(cè)中熒光--側(cè)向散射圖中可以明顯的區(qū)別于被染色的細(xì)菌。用meilungreen和PI對(duì)細(xì)菌培養(yǎng)液進(jìn)行簡(jiǎn)單染色，在流式細(xì)胞儀上分析樣本前加入固定數(shù)量的微球。活菌和死菌以及微球在熒光--側(cè)向散射圖中很容易區(qū)分，然后通過(guò)細(xì)胞圖中細(xì)菌事件數(shù)與微球事件數(shù)的比值來(lái)計(jì)算死菌和活菌的濃度（見(jiàn)下方圖1）。

細(xì)菌活力標(biāo)準(zhǔn)：

細(xì)菌的生存能力不能用簡(jiǎn)單的生理或者形態(tài)參數(shù)來(lái)定義，因此單一的生存能力測(cè)定可能會(huì)在實(shí)驗(yàn)中引入一定的偏差。某些條件下，細(xì)菌受損的細(xì)胞膜可能會(huì)修復(fù)，即使是這種細(xì)菌在實(shí)驗(yàn)中也可能被標(biāo)記為“死”細(xì)菌。相反，一些細(xì)胞膜完整的細(xì)菌可能無(wú)法在營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中繁殖，但卻被認(rèn)定為“活”細(xì)菌。結(jié)合幾種不同的生存能力測(cè)定方法，如膜滲透性、酶活性和氧化還原電位，可以更全面地評(píng)估細(xì)菌的生存能力，并消除任何單一生存能力測(cè)定方法的固有限制。

對(duì)比實(shí)驗(yàn)

以事實(shí)為依據(jù)，與進(jìn)口對(duì)比毫不遜色

1. 革蘭氏陰性菌（大腸桿菌為例）活死細(xì)菌染色流式檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

圖1：大腸桿菌活死細(xì)菌染色流式檢測(cè)結(jié)果。大腸桿菌的活菌（未處理）、死菌（70%乙醇處理）懸液按一定比例混合，分別采用本試劑盒和進(jìn)口品牌試劑盒進(jìn)行流式檢測(cè)。通過(guò)綠色熒光或者紅色熒光對(duì)側(cè)向散射結(jié)果圖，分別圈出細(xì)菌群與標(biāo)準(zhǔn)微球群，然后通過(guò)綠色熒光對(duì)紅色熒光流式結(jié)果圖展示細(xì)菌群的分布。活、死菌的濃度計(jì)算可以通過(guò)綠色或者紅色熒光對(duì)側(cè)向散射流式結(jié)果圖、或者綠色熒光對(duì)紅色熒光流式結(jié)果圖，根據(jù)實(shí)際情況選擇活死菌分群最明顯的結(jié)果圖來(lái)進(jìn)行計(jì)算?；睢⑺谰旱姆植嘉恢脮?huì)因細(xì)菌種類(lèi)和參數(shù)設(shè)置而存在差別，一些點(diǎn)會(huì)分布于劃定區(qū)域以外，也應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)脑u(píng)估。結(jié)果顯示美侖活死細(xì)菌染色試劑盒檢測(cè)效果媲美進(jìn)口品牌。

2. 革蘭氏陽(yáng)性菌（乳酸桿菌為例）活死細(xì)菌染色流式檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

圖2：乳酸桿菌活死細(xì)菌染色流式檢測(cè)結(jié)果。乳酸桿菌的活菌（未處理）、死菌（電穿孔處理）懸液按一定比例混合，分別采用本試劑盒和進(jìn)口品牌試劑盒進(jìn)行流式檢測(cè)。通過(guò)綠色熒光或者紅色熒光對(duì)側(cè)向散射結(jié)果圖，分別圈出細(xì)菌群與標(biāo)準(zhǔn)微球群，然后通過(guò)綠色熒光對(duì)紅色熒光流式結(jié)果圖展示細(xì)菌群的分布?；睢⑺谰臐舛扔?jì)算可以通過(guò)綠色或者紅色熒光對(duì)側(cè)向散射流式結(jié)果圖、或者綠色熒光對(duì)紅色熒光流式結(jié)果圖，根據(jù)實(shí)際情況選擇活死菌分群最明顯的結(jié)果圖來(lái)進(jìn)行計(jì)算。活、死菌群的分布位置會(huì)因細(xì)菌種類(lèi)和參數(shù)設(shè)置而存在差別，一些點(diǎn)會(huì)分布于劃定區(qū)域以外，也應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)脑u(píng)估。結(jié)果顯示美侖活死細(xì)菌染色試劑盒檢測(cè)效果媲美進(jìn)口品牌。圖3. 使用美侖CCK-8對(duì)細(xì)胞狀態(tài)的影響。

操作簡(jiǎn)易流程&適用菌種范圍

1. 準(zhǔn)備菌懸液

2. 細(xì)菌染色

3. 制備單染管進(jìn)行設(shè)備調(diào)節(jié)

4. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)染色后的細(xì)菌

5. 計(jì)算：菌濃度=(菌群分布區(qū)事件數(shù)×稀釋倍數(shù))/(微球分布區(qū)事件數(shù)×5×10^-6)/ ml

本試劑盒適用菌種廣泛，主要包括：蠟樣芽胞桿菌、枯草桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、大腸桿菌、肺炎克雷伯菌、黃體微球菌、草分枝桿菌、銅綠假單胞菌、沙門(mén)氏菌、沙雷菌、宋內(nèi)志賀菌、金黃色葡萄球菌和釀膿鏈球菌等。以上菌種通過(guò)該試劑盒檢測(cè)的計(jì)數(shù)結(jié)果均能夠與標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)結(jié)果表現(xiàn)出良好的相關(guān)性。 

其他信息請(qǐng)參考說(shuō)明書(shū)。

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