一、細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)知識(shí)培訓(xùn)
1、細(xì)胞培養(yǎng)概述
2、細(xì)胞培養(yǎng)所需設(shè)備與培養(yǎng)用液
3、培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)特征
4、原代培養(yǎng)與傳代培養(yǎng)、凍存與復(fù)蘇
5、細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及解決方法
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二、細(xì)胞凋亡與增殖檢測(cè)知識(shí)培訓(xùn)
01 細(xì)胞增殖與活力檢測(cè)
膜損傷檢測(cè)
代謝活性檢測(cè)
DNA合成檢測(cè)
熒光標(biāo)記檢測(cè)
目錄 ATP水平測(cè)定
02 細(xì)胞凋亡與增殖檢測(cè)
磷酯酰絲氨酸外翻檢測(cè)
線粒體膜電位檢測(cè)
DNA片段化檢測(cè)
Caspase活性檢測(cè)
熒光標(biāo)記細(xì)胞形態(tài)檢測(cè)
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三、熒光素酶報(bào)告基因基礎(chǔ)知識(shí)培訓(xùn)
報(bào)告基因系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于真核生物基因表達(dá)和細(xì)胞生理學(xué)研究,包括受體活性、轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、mRNA加工和蛋白質(zhì)折疊等?!半p報(bào)告基因”通常被用來提高實(shí)驗(yàn)精確度,即在一個(gè)系統(tǒng)中同時(shí)表達(dá)和測(cè)量?jī)蓚€(gè)獨(dú)立的報(bào)告基因。一般來說,實(shí)驗(yàn)組報(bào)告基因與具體實(shí)驗(yàn)條件的影響是相關(guān)的,而共同轉(zhuǎn)染的內(nèi)對(duì)照組報(bào)告基因則是用來充當(dāng)校正參數(shù),作為內(nèi)參提供反應(yīng)基線。將實(shí)驗(yàn)組的結(jié)果與內(nèi)對(duì)照組的結(jié)果進(jìn)行約化處理,可降低由細(xì)胞存活率或轉(zhuǎn)染效率的差異而導(dǎo)致的結(jié)果波動(dòng),同時(shí)還可消除由取樣體積、細(xì)胞裂解效率和儀器測(cè)定引起的實(shí)驗(yàn)誤差。因此,雙報(bào)告基因檢測(cè)可以通過減少外部影響來獲得更可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。應(yīng)用于啟動(dòng)子活性檢測(cè)、miRNA靶基因驗(yàn)證 (針對(duì)3’UTR元件),本文就報(bào)告基因種類,特點(diǎn),檢測(cè)原理等進(jìn)行介紹。
詳情參見雙酶報(bào)告基因基礎(chǔ)知識(shí)培訓(xùn)
四、細(xì)胞蛋白熒光標(biāo)記知識(shí)培訓(xùn)
許多類型的熒光試劑相繼被開發(fā)用于細(xì)胞染色,化學(xué)標(biāo)記蛋白質(zhì)、核酸和其他生物分子。當(dāng)特定抗體或純化的生物分子被熒光染料化學(xué)標(biāo)記后,它們就成為檢測(cè)靶抗原的熒光探針,可被應(yīng)用于細(xì)胞成像、高通量分析、流式細(xì)胞術(shù)、western blotting和ELISA等。Meilunbio?可為您提供廣泛的熒光試劑產(chǎn)品包括細(xì)胞標(biāo)記,蛋白標(biāo)記,其他熒光染料等。本文就如何進(jìn)行細(xì)胞標(biāo)記、蛋白標(biāo)記,從其原理及操作進(jìn)行了介紹,并闡述了常見問題的應(yīng)對(duì)措施。
詳情參見細(xì)胞蛋白熒光標(biāo)記知識(shí)培訓(xùn)
五、蛋白提取基定量礎(chǔ)知識(shí)
蛋白質(zhì)參與生物體內(nèi)幾乎所有的生命活動(dòng),對(duì)蛋白質(zhì)的研究有助于揭示生命活動(dòng)現(xiàn)象和分子生物學(xué)機(jī)理,蛋白質(zhì)的提取是研究蛋白質(zhì)的第一步,通常是提取特定組織細(xì)胞中的總蛋白,或是處于細(xì)胞特定位置的蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)提取實(shí)驗(yàn)的成敗,直接影響后續(xù)的蛋白質(zhì)檢測(cè)和提純等實(shí)驗(yàn)操作。 蛋白質(zhì)的精確定量是蛋白質(zhì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)所必需的,蛋白質(zhì)定量可以分為總蛋白定量和單種蛋白定量,總蛋白定量分析有多種不同方法,包括紫外吸光值檢測(cè)法、Lowry檢測(cè)法、BCA檢測(cè)法和Bradford檢測(cè)法等。單種蛋白定量主要包括酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA),Western blot和質(zhì)譜分析等。詳情請(qǐng)參考蛋白提取定量新手上路。
六、蛋白電泳及免疫印跡基礎(chǔ)知識(shí)培訓(xùn)
電泳是帶電顆粒在電場(chǎng)作用下向著與其本身所帶電荷相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象,而聚丙烯酰胺凝膠蛋白電泳是帶有電荷的蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠的介質(zhì)中向其所帶電荷相反的電極移動(dòng),又因?yàn)榫郾0纺z孔徑的關(guān)系,使不同分子量的蛋白質(zhì)分離開。按照制備凝膠的支持物形狀和電場(chǎng)方向可分成多種不同的電泳技術(shù),本文主要講述使用最廣泛的垂直平板凝膠電泳,這種電泳的優(yōu)點(diǎn)是可以在同一條件下,在同一凝膠中對(duì)多種樣品進(jìn)行電泳。
蛋白免疫印跡,也稱為Western blotting,是從多種復(fù)雜蛋白質(zhì)中檢測(cè)目的蛋白質(zhì)的一種方法,這種技術(shù)誕生于20世紀(jì)70年代,由Towbin等人發(fā)明了該項(xiàng)技術(shù),現(xiàn)在已經(jīng)成為蛋白質(zhì)分析的常規(guī)技術(shù)。該實(shí)驗(yàn)流程是將處理好的蛋白樣品依據(jù)蛋白質(zhì)的分子量、電荷數(shù)和等電點(diǎn)等性質(zhì)對(duì)其進(jìn)行電泳分離,然后轉(zhuǎn)移到固相載體上,再利用抗體和抗原之間的特異性結(jié)合的原理,通過抗體(一抗)識(shí)別所要研究的蛋白質(zhì),然后用能夠與一抗特異性結(jié)合的抗體(二抗)識(shí)別一抗,二抗一般會(huì)偶聯(lián)能夠檢測(cè)的酶,通過對(duì)酶濃度的檢測(cè),從而對(duì)目的蛋白質(zhì)進(jìn)行定性或半定量實(shí)驗(yàn)。綜上所述,免疫印跡可以分為兩個(gè)步驟:一是蛋白質(zhì)由凝膠轉(zhuǎn)移至固相載體;二是對(duì)目的蛋白的特異性檢測(cè)。
請(qǐng)參考蛋白電泳免疫印跡基礎(chǔ)知識(shí)培訓(xùn)。
七:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型基礎(chǔ)知識(shí)
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型制作原則
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用藥量的計(jì)算
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥方法
常見疾病模型造模方法
請(qǐng)參考實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型基礎(chǔ)知識(shí)
八:信號(hào)通路研究方法策略基礎(chǔ)知識(shí)
信號(hào)蛋白表達(dá)水平分析
信號(hào)蛋白在細(xì)胞內(nèi)定位
關(guān)鍵信號(hào)分子抑制或增強(qiáng)
請(qǐng)參考信號(hào)通路研究方法策略基礎(chǔ)知識(shí)