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Meilunbio 細胞膜探針系列重磅產品
MB6190 DiD細胞膜熒光探針紅色
（DiD Perchlorate）10MG [￥400.00]
MB4239 DiO細胞膜熒光探針綠色
（DiO perchlorate）10MG [￥400.00]
MB4240 DiI細胞膜熒光探針橙紅色
（Dii perchlorate）10MG [￥400.00]
MB12482 DiR細胞膜熒光探針;DiR碘化物
（DiR iodide）25MG [￥980.00]
染料 DiD, DiI, DiO 和 DiR 是一類親脂性熒光染料家族，用于標記細胞膜等脂溶性生物結構和疏水性組織。這是一類環(huán)境敏感型熒光染料，當它們與膜結合或者與親脂性生物分子（例如蛋白質，雖然在水中其熒光強度很弱）結合時，其熒光強度顯著增強。它們具有很高的淬滅系數，偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。一旦應用于細胞中，這種染料會在細胞內質膜中逐步擴散，導致在其最佳濃度條件下，將整個細胞膜染色。它們不同的熒光顏色：DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細胞多色彩熒光成像分析和流式細胞術提供了一種便捷的工具。
圖1. 四種細胞膜熒光探針鑲嵌磷脂雙分子層的發(fā)射波長
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貨號 |
品名 |
熒光顏色 |
分子量 |
Ex (nm) |
Em (nm) |
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MB6190 |
DiD細胞膜紅色熒光探針 |
紅色 |
959.91 |
644 |
663 |
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特點 |
DiD（紅色熒光）可以用來對活細胞進行成像和流式分析。DiD可以用633 nm He–Ne 激光器激發(fā)，有著比 DiI 更長的激發(fā)波長和發(fā)射波長，為標記具有顯著內在熒光的細胞和組織提供了有價值的替代方案。 |
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應用實測 |
本品配成 5mM 溶液后為深藍色液體溶液，澄清且無可見異物； 進行熒光染色檢測：工作條件：熒光顯微鏡，C6 細胞，400×，工作濃度 5μM。 結果：經細胞膜熒光染色，在40倍物鏡下可看到清晰紅色熒光。
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MB4239 |
DiO細胞膜綠色熒光探針 |
綠色 |
881.72 |
482 |
500 |
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特點 |
DiO可以使用標準的FITC濾光器。DiO通常不會明顯影響細胞的生存力，因此被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經等細胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑(long-term tracer)。除了最簡單的細胞膜熒光標記外，還可以用于檢測細胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程中細胞遷移，通過FRAP檢測脂在細胞膜上的擴散，檢測細胞毒性和標記脂蛋白等。 |
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應用實測 |
本品配成 5mM 溶液后為黃色液體溶液，澄清且無可見異物；進行熒光染色檢測：工作條件：熒光顯微鏡，NIH/3T3 細胞，400×，工作濃度 5μM。 結果：經細胞膜熒光染色，在40倍物鏡下可看到清晰綠色熒光。
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MB4240 |
DiI細胞膜橙紅色熒光探針 |
橙紅色 |
933.88 |
550 |
567 |
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特點 |
DiI 即 DiIC18(3)，可以使用標準的TRITC濾光器。DiI比DiO更亮。DiI通常不會影響細胞的生存力，因此被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經等細胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑(long-term tracer)。被DiI標記的神經細胞在體外培養(yǎng)的條件下可以存活長達4周，在體內可以長達一年。DiI在經過固定的神經元細胞膜上的遷移速率為0.2-0.6mm/day，在活的神經元細胞膜上的的遷移速率為6mm/day。DiI除了最簡單的細胞膜熒光標記外，還可以用于檢測細胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程中細胞遷移，通過FRAP檢測脂在細胞膜上的擴散，檢測細胞毒性和標記脂蛋白等。 |
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應用實測 |
本品配成 5mM 溶液后為紫粉色液體溶液，澄清且無可見異物； 進行熒光染色檢測：工作條件：熒光顯微鏡，C6 細胞，400×，工作濃度 5μM。 結果：經細胞膜熒光染色，在40倍物鏡下可看到清晰橙紅色熒光。
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MB12482 |
DiR細胞膜熒光探針;DiR碘化物 |
深紅色 |
1013.39 |
748 |
780 |
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特點 |
DiR在活體成像或者示蹤中非常有用，因為其所發(fā)射的紅外光可以高效地穿過細胞和組織，并且在紅外光范圍內，其本底熒光水平很低。DiR 的兩個18-碳鏈插入到細胞膜，從而進行特定的、穩(wěn)定的細胞染色，幾乎不會發(fā)生細胞間的染料轉移。 |
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應用實測 |
用DIR-RGD-NP界定腫瘤相關血管 (A) Delineation of tumor vascularity. White light image of tumors showing the outline of tumor-associated vasculature only when dye was administered in RGD-coated nanoparticles; (B) Ex vivo imaging and colocalization of mCherry and DIR signals in dissected tumors (from top: 2mm, 5mm, and 10mm in size). Source: Novel approach for the detection of intraperitoneal micrometastasis using an ovarian cancer mouse model by Alvero et al., Scientific Reports, Jan. 2017.
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操作方法
1. 染色液制備
（1）配置DMSO或EtOH 儲存液：儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。
【注】未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復凍融。
（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。
【注】工作液最終濃度建議根據不同細胞系和實驗體系來優(yōu)化。建議從推薦濃度的10倍范圍內開始最優(yōu)濃度的摸索。
2. 懸浮細胞染色
（1）加入適當體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×106/mL。
（2）37 ℃孵育細胞 2～20min，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同。可以20min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結果。
（3）孵育結束，按1000～1500 rpm離心5min。
（4）傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預熱的生長培養(yǎng)液重懸細胞。
（5）重復（3），（4）步驟兩次以上。
3. 貼壁細胞的染色
（1）將貼壁細胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。
（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。
（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。
（4）37 ℃孵育細胞 2～20min，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同。可以20min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結果。
（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，孵育5～10min，然后吸干培養(yǎng)基。
4. 顯微鏡檢測
DiD，DiO，DiI，DiR選擇合適的濾光器觀察。
5.流式細胞儀檢測
經DiD，DiO，DiI，DiR染色的細胞可分別用流式細胞儀的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3或FL4通道檢測
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